全自动生化分析仪工作基本原理
作者:小编 | 发布时间: 2026-08-10 | 次浏览
1．流动式指测定项目相同的各待测样品与试剂混合后的化学反应在同一管道流动的过程中完成。这是
2．分立式指各待测样品与试剂混合后的化学反应都是在各自的反应杯中完成。其中有几类
(2)离心式自动生化分析仪，每个待测样品都是在离心力的作用下，在各自的反应槽内与试剂混合，完成
3．袋式自动生化分析仪是以试剂袋来代替反应杯和比色杯，每个待测样品在各自的试剂袋内反应并测定。
4．固相试剂自定生化分析仪(亦称干化学式自动分析仪)是将试剂固相于胶片或滤纸片等载体上，每个
待测样品滴加在相应试纸条上进行反应及测定。操作快捷、便于携带是它的优点。
样品包括校准品、质控品和病人样品。系统一般由样品装载、输送永利集团和分配等装置组成。
(1)样品盘(Sampledisk)，即放置样品的转盘有单圈或内外多圈，单独安置或与试剂转盘或反应转盘相
套合，运行中与样品分配臂配合转动。有的采用更换式样品盘，分工作和待命区，其中放置多个弧形样
品架(Sector)作转载台，仪器在测定中自动放置更换，均对样品盘上放置的样品杯或试管的高度、直径
和深度有一定要求，有的需专用样品杯，有的可直接用采血试管。样品盘的装载数，以及校准品、质控
品、常规样品和急诊样品的装载数，一般都是固定的。这些应根据工作需要选择。
(2)传动带式或轨道式进样即试管架(Rack)不连续，常为10个一架，靠步进马达驱动传送带，
(3)链式进样试管固定排列在循环的传动链条上，水平移动到采样位置，有的仪器随后可清洗试管。
分配加样装置大都由注射器、步进马达或传动泵、加样臂和样品探针等组成，①注射器(syrineunit)。
根据注射器直径和活塞移动距离的多少，定量吸取样品或试剂。它的精度决定加样的
精度，一般可精确到1微升。注射器漏液时，首先考虑是否探针堵塞，其次是注射器活塞磨损等。有
的加液系统采用容积型注射泵和数控脉冲步进马达，提高精度。②样品探引(Probe)
与加样臂相联，直接吸取样品。探针均设有液面感应器，防止探针损伤和减少携带污染。有的设有阻
塞检测报警系统当探针样品中的血凝块等物质阻塞时．仪器会自动报警冲洗探针，并跳过当前样品，对
下一样品加样。有的还有智能化防撞装置遇到阻碍探针立即停止运动并报警。即使如此，它仍是非正规
的高低、最低液面高度等进行设置外、，样品容器的规格、放置以及液面高度等设定条件不得随意改变。
在某些仪器上，采样器和加液器组合在一起，加样品和加试剂或稀释液一个探针一次完成。③加样臂。
(加试剂)。它的运动方式，与仪器工作效率及工作寿命有一定关系。④阀门用以决定液体流动方向。⑤
稀释系统。对样品进行预稀释、过后稀释或加倍，对标准原液系列稀释等。不同仪器的稀释方式有所差
(1)试剂仓常与试剂转盘结合在起。多数仪器将试剂仓设为冷藏室，以提高在线试剂的稳定期。
⑵分配加液装置(Dispenseunit)。与样品系统的类似。，试剂探针常常可以对试剂预加温，双试剂系统
格。应根据工作量和试剂规格．考虑试剂瓶残留死体积和更换频率，合理选用。独特设计的卡式试剂盒，
(4)配套试剂常有条形码，仪器设有条形码检查系统，可对试剂的种类、批号、存量、有效期和校准曲
(5)试剂瓶盖自动开关系统，更有利于试剂保存。有的仪器可在运行中添加，更换试剂，有的则须在暂
一般由扫描系统、信号整形和译码器三部分组成。扫描系统以光源扫射黑条白空相间的条码符号由于条
和空对光的反射不同、不同宽窄的条符反射光持续时间不同，产生强度不同的反射光．再经光电转换元
件接收并转换成相应强度的电信号，最后通过信号整形，由译码器解译。系统自动识别样品架及样品编
条形码需要条形码输入器，条形码阅读系统与条形码要匹配。已有全自动试管分配暨条形码粘贴准备系
⑴反应盘装载一系列反应比色杯(Cuvettes)，多为转盘形式。反应测定过程中按固定程序，
在加样臂、加液臂、搅拌棒、光路和清洗装置之间转动。有的仪器在反应杯中完成反应后再吸入比色
杯比色，现在更常见反应和检测同在比色杯中进行，效率更高，尤其适于连续监测法。比色杯多采用
硬质石英玻璃、硬质玻璃、无紫外光吸收的丙烯酸塑料等，使用寿命不一。Dimension系列的比色杯
在机器内自动制造，自动封口，免冲洗，无污染。流动池式主要在小型分析仪用。容积一般几十微升，
蠕动泵(Pump)。半自动生化仪需要蠕动泵抽吸反应液进人流动比色池作测定。要求定期对蠕
动泵校准，即通过吸人定量的水来检验泵的吸液量是否准确。一般均设有泵校准功能。
(2)混合装置(Mixingunit)如采用多头回旋搅拌棒(二头双清洗式搅拌系统)。搅拌棒常具特氟隆不粘涂
(3)温控装置生化分析仪通过恒温控制装置来保持孵育温度的调控和恒定也是由计算机来控
制的，理想的孵育温度波动应小于土 01 C。保持恒温的方式有三种。①空气浴恒温：即在比 色杯与加热
器之间隔有空气。空气浴恒温的特点是方便、 速度快、 不需要特殊材料，但稳定 性和均匀性较水浴稍差。
是温度恒定， 但需特殊的防腐剂以保证水质的洁净， 且要定期更换循环水。 日立系统生化分 析仪采用
的即是水浴循环恒温装置。 ⑧恒温液循环间接加热式： 结构原理是在比色杯周围流 动着一种特殊的恒温
小的空气狭缝， 恒温液通过加热狭缝的空气达到恒温， 其温度稳定性优于干式， 和水浴式循 环式相比
探针和搅拌棒采用激流式等方式自动冲洗。清洗装置一般由吸液针、吐液针和擦拭刷组成。 清洗工作流
程为吸出反应一吸于一注入纯水一吸干一擦干。 清洗液有碱性和酸眭两种。 一般
说来，在吸出反应液后， 仪器先用碱性液冲洗， 再用酸性液冲洗， 最后用去离子水冲洗三遍。 擦拭刷
的功能是吸去杯壁上挂淋的水， 刷体内部有负吸装置。 使用进程中要注意擦拭刷是否 磨损。
值得注意的是，对于常规冲洗还不能清除交叉污染 (carry—over)的实验要特别处理，以减少
交叉污染或携带污染。 例如， 胆固醇测定试剂中的胆酸盐对血清总胆汁酸的测定有干扰， 在
消除交叉污染的程序中，可输入程序，指令总胆汁酸不在测试胆固醇的比色杯中进行测定， 如不能避开，
冲洗水的水温自动控制到与恒温反应槽温度相近， 保证反应系统的恒温， 并增加去污力。 急 诊测定后
采用针对性清洗， 似乎比采用固定的全面清洗程序更有效率更经济。 耗水量仪器间 相差较大。
选择功能(OSS)。即仪器根据试剂或样品间交叉污染的项目组合，自动改变检测顺序，避免 互有影响的
(1) 光源多数采有卤素灯，工作波长为325〜800nm。卤素灯的使用寿命较短，一般只有1 000〜l 500 小
时。当灯的发光强度不够时，仪器会自动报警，应及时更换，部分生化分析仪采用 的是长寿命的氙灯， 24
(2) 比色杯 自动生化分析仪的比色杯也是反应杯。比色杯的光径 0.5 〜0.7 cm 不等，通常为
石英或优质塑料。 光径小的省试剂， 当比色杯光径小于 1 cm 时，部分仪器可自动校正为 1cm。 生化分
析仪的比色杯自动冲洗装置在仪器完成比色分析后做自动反复冲洗、 吸干的动作， 比
色杯在自动检查合格后继续循环使用。 要及时更换不合格的比色杯。 如采用的是石英比色杯， 比色杯要
(3) 单色器与检测器各类自动生化分析仪应用的是可见一紫外吸收光谱法， 即监测 200-700nm
光区某特定波长下发色基团吸光度的变化， 辅以微机软件系统的计算来完成测定。 可见一紫 外吸光谱定
传统的分光度测定普遍采用前分光， 即在光源灯和样品杯之间先要用滤光片、 棱镜或光栅分 光，通过可
调的狭缝，取得与样品“互补”的单色光之后，照射到样品杯，再用光电池或光 电管作为检测器，测定样
而现代大多生化分析仪采用后分光测量技术。后分光测定：将一束白光 (混合光 )先照到样品
杯，然后再用光栅分光， 同时用一列发光二极管排在光栅后面作为检测器。 后分光的优点是 不需移动仪
器比色系统中的任何部件， 可同时选用双波长或多波长进行测定， 这样可降低比 色的噪声，提高分析的
生化仪的单色器即分光装置， 有干涉滤光片和光栅分光两类。 干涉滤光片有插入式和可旋转 的圆盘式两
种。 插入式就是将需用的滤光片插入滤片槽中， 圆盘式是将仪器配备的滤光片都 安装在圆盘中， 使用
时旋转至所需滤光片处即可。 干涉滤光片价格便宜，但易变潮霉变，从 而影响检测结果的准确性，半自
光栅分光可分为全息反射式光栅和蚀刻式凹面光栅两种。 前者是在玻璃上覆盖一层金属膜后 制成，有一
定程度的相差易被腐蚀；后者是将所选波长固定地刻制在凹面玻璃上，耐磨损、 抗腐蚀、无相差。全自
计算机是自动生化分析仪的大脑，标本、试剂的注加和识别，条码的识别，恒温控制，冲洗
控制， 结果打印，质控的监控， 仪器各种故障的报警等都是由计算机控制完成。仪器一代胜 过一代， 自
动化程度越来越高， 有的仪器甚至可以完成部分日常保养程序。 自动生化分析仪 数据处理功能日趋完善，
果的统计等，生化仪都可进行处理。 计算机还可以调看病人的数据、仪器的性能指标、 仪器
的运行状态等。 自动生化仪中的质控和病人结果还可通过仪器计算机与实验室信息系统 (LIS)
(1) 微处理器和主机电脑。用于仪器各个单元和总体控制，应具有程控操作、故障诊断、多 种数据处理和
储存等强大功能。一般根据仪器功能的需要和电脑硬件市场的主流产品来配 置。
(3) 系统及配套软件。多采用 Windows-NT 或 windows 界面，具全图形化设计，多菜单选择， 信息导引，
故障报警，帮助提示，人机“对话” ，方便直观，不少仪器有即时反应曲线 c 等数据接口与其他计算机、打印机等设备传输数据。具人工智能双向通讯 系统 (Host
query) ，仪器可直接自行向主电脑询问病人／样品基本资料及检测项目。有的具 远程通讯及监控功能，
自动生化分析仪均采用程序控制的自动分析。 分析程序一经确定， 工作时只要简单地输入测 定项目或编
码， 仪器即可按编制程序自动完成测定、 计算和报告。 具体的控制程序因仪器而 异，一般分为固定程
序和自编程序两种。 固定程序为仪器厂家预先设定， 常与指定试剂配套； 有的不能更改， 有的也可由
用户修改。它与配套试剂一同使用时， 既方便工作，质量也比较 可靠，但成本较高。自编程序灵活实用，
便于开发新项目，强调程序的灵活性。比如，成批 测定过程中应可随时插入急诊标本测定而不打乱原有
生化分析仪的正确应用， 只是掌握了测定技术原理还不够， 还需要对具体仪器的工作流程及 测定计算方
工作流程可以通过仪器的测定周期来考察。 重点关注比色杯空白读数点 (CB)、加样品点(S)、
各试剂加液点(R1、R2、……)、试剂空白读数点(RB)、各测定读数点(P)、各点时间间隔及 周期总时间
等。 每个仪器一般都在反应转盘的固定位置和反应测定周期的固定时间设置样品 试剂和稀释的加液位，
仪器在各个吸光度读数点读取的吸光度数据， 并不一定都纳人浓度计算。 仪器往往根据仪器 定义和操作
者设定的要求， 对吸光度原始数据作计算处理， 转换成所谓反应数据， 再按系数
1．HITACH 7170 的终点法测定点 （A ） 吸光度计算为 （AX+AX －1）／2。实际吸光度 =吸光度数 据
3．Monarch 1 000 两点终点法的反应数据。 （终点测定吸光度一终点空白吸光度 ）一（始点测定
4. AU 600 的终点法（带试剂空白，END 法）的反应数据=终点吸光度一 P0 点吸光度（试剂空 白，RB）。
终点法（不带试剂空白，END）.法）的反应数据=终点吸光度-比色杯水空白（WB）。
空白）的反应数据=［加第二试剂后测定点读数一 P0 点读数］一［加第 二
I .试验项目设置对试验名称、编码，试验组合 （Profile）、试验轮次（Round），必要时包括试验
3. 剂设置根据有关试验参数，设置各试验的试剂位、试剂瓶规格，必要时设定试剂批号、 失效期等。
5. 质控设置 根据质控要求。设置质控物个数，质控规则，质控项目及相应质控参数等。
6. 样品管设置 包括样品管类型，残留液高度（死体积） ，识别方式等设置。
开机 （预热、 保养）-设置开始条件 （日期时间索引、 轮次、 样品起始号等 ）-根据需要， 申请校准、
质控和病人测定项目 （包括架号、杯号或顺序号。测定中可继续申请 ）_装载校准品、质控物
和病人标本 -装载试剂 -核对仪器起始状态（未应用条码系统，采用顺序识别样品时，尤其要
核对测定起始编号是否与样品架号和申请号相符） -定标和质控测定 - 检查定标和质控结果 -
病人标本测定 -测定过程监控 （试剂检查， 观察分析结果， 编辑校正） -数据传递 （打印报告， 向检验
管理系统传输，包括工作量统计、财务统计、病人情况追踪、质控分析等 ）。测定后
1．要了解和熟悉仪器的各种警示符号的含义与作用在正确设定参数的前提下，利用各种警 示符能提高我
2．要熟悉和灵活运用仪器的相关操作屏 （界面 ） 如：用反应过程监测 （Reaction Monitor） ，观
解不同日期段病人测定均值及数据分析；运用分析数据编辑 （Data Edit） 察看和校正测定数 据。
3．校准的检查要充分利用仪器设置的功能，监测校准曲线图形、各校准点吸光度值 （不能忽
略试剂空白值及空白速率值 ）、计算 K 值等的波动情况，以及与以往的比较。必要时，应进 一步检查反
4．病人结果的检查除了目测观察或用血清指数了解标本性状，注意和了解临床资料及诊断 外，学会分析
（一 ）终点法 （End point method） 根据反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其吸光度大小，对
物质进行定量分析的方 法。对一般化学反应来说， 反应完全 （或正、 逆反应动态平衡 ）、反应产物稳
定时为反应终点。 对抗原一抗体反应来说，是抗原和抗体完全反应、形成最大且稳定的免疫复合物时为
终点。 在反应时间进程曲线上为与 x 轴平行线区段。 在测定计算方式上， 一般分为一点法和两点法 两
1. 一点法（One Point）以试剂和样品混合之前的空气空白 （GB）、水空白（WB）或试剂空白（RB）
的吸光度值为测定计算基点， 以反应终点的吸光度读数减去空白读数， 得到反应吸光度。 通 过与相同
条件下校准液反应吸光度的比较， 求得测定结果。 常与一点校准法配合使用， 即采 用一个校准浓度，
反应终点的吸光度读数减去始点读数。 一定条件下可降低样品对反应或反应本身的特 异性于扰 （主要指
色度干扰 ）。常采用双试剂，多以加 R2 前某一点作测定始点；某些情况下， 也可以加 R2 后一点作测
固定时间法 （Fixed Method） 与两点终点法的区别只是在： 测定读数的末点不在反应平衡区段，
3．三点终点法 即双终点法， 在一个通道内一次进行两项反应相关的终点法测定。 比如同测 游离脂肪酸
又称速率法（Rate Assay）。即连续监测反应过程，根据所测定的产物生成或底物消耗的速度 进行定量
分析的方法。在反应时间进程曲线上为反应呈恒速区段 （斜率保持不变 ），常用于酶 活性线性反应期测
1．连续监测法即零级反应速率法， 亦称斜率法。 在较长的反应时间区段内 （至少 90-120 秒），
每隔一定时间（常为2~30 秒）读取一次吸光度值， 至少读取4 点，得到 3 个厶A ； 一般将连续 多次
读数作最小二乘法处理， 读数间隔时间太短的作带速率时间 （TR）多点法处理，均取线性
反应部分的读数，求出单位时间内的反应速率厶 A/min。此法必须以零级反应为测定计算的
基础，因为只有在零级反应下，单位时间内的吸光度变化 （反应速率厶A/min）才与酶活力呈
正比。 此法相对减少了分析误差，大大提高了分析速度和准确性。 但是，半自动生化分析仪
采用单样品连续监测，相当耗时。应用连续监测法，首先应准备线性范围内的高、中、低浓 度的样品， 分
别作反应时间进程曲线， 了解不同浓度下反应全过程， 兼顾确定延迟时间和线．两点速率法即所谓拟一级速率法。 在反应中选取两时问点 t 1、t 2，读取吸光度 A 1、A2，
计算（A2-A1），（t2-t1）= △ A，△ t。此方法与终点两点法的区别主要有两点：后一读数点反应 未达
终点，以速率计算结果。它与连续监测法比较，缺点在于人为确定 t 1、t 2，不定因素
较多，不能保证反应在 t 1-t 2 期间呈线性，影响结果准确性；应在常规测定前，先做预试验 来确定线性
时间段。若在选择的时间段内反应不成线性 （如零级反应期短，仪器无法设置或
测定 ），则只能改用终点法。优点在于方法简单；酶活力较低、测定吸光度值较小时，可增 加测定时间
在分光光度法中， 常利用空白溶液来调节仪器的吸光度零点， 或用来抵消某些测定的干扰因 素。在生化
分析仪测定中，除了采用双或多波长、 两点法等排除背景干扰外，常要运用专门 空白测定， 以便从样品
测定吸光度中扣除其影响。 正确选择空白校正， 对提高准确度起重要 作用。
1．试剂空白一般在方法类型和校准模式中，即分为有或无试剂空白两大类。试剂空白单独 测定或与校准
配合测定， 并需预选装载去离子水样品杯或试剂空白架。 校准或病人样品的各 测定点吸光度，均要扣除
相应测定点的试剂空白吸光度或空白速率值。无试剂空白的方法， 多直接以反应杯的水空白作为测定基
在不少仪器中， 试剂空白测定类似校准测定， 并非在病人样品测定时实时测定。所以， 要注 意它的测
2.样品空白 主要为了消除样品本身混浊或色度的干扰。 常采用空白通道法， 测定校正结果 = 显色反应通
道结果 -空白通道结果。多数仪器须另外占用测定通道，分析速度减半，但去干 扰的准确性应高于两点终
